注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產品名稱：肝癌細胞
英文簡稱：Hep 3B2.CQ-E7細胞

貨號：LZ-X969482
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

灰葡萄孢黃獨素B;DiosbulbinBDey/Engley中和肉湯基礎腺苷A2A受體抗體

白僵菌葫蘆素B;cucurbitacinBDey/Engley中和瓊脂基礎AP2關聯激酶1抗體

出芽短梗霉胡麻屬苷;Sesamoside緩沖蛋白胨水（BPW）氨酰tRNA合成酶2抗體

出芽短梗霉槲皮素-7-O-葡萄糖苷;Quercet硝酸鐵瓊脂硝酸鉄寒天FerricNitrateAgar凋亡關聯酪氨酸激酶抗體

溫特曲霉葒草苷;Orientin培養(yǎng)基腺苷三磷酸結合盒轉運體A1抗體

宇佐美曲霉;Tetrodotoxin支原體肉湯培養(yǎng)基マイコプラズブイヨン基礎MycoplasmaBrothMediumATP結合蛋白家族5抗體

宇佐美曲霉荷葉堿;Nuciferine精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基マイコプラズマブロス培地MycoplasmaBrothMediumwithArginineATP結合蛋白家族6抗體

宇佐美曲霉黃決明素;Chrysoobtusin支原體半流體培養(yǎng)基マイコプラズマ半流動培地MycoplasmasemifluidMediumATP結合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體

棲土曲霉紅景天苷;Salidroside支原體瓊脂培養(yǎng)基マイコプラズマ寒天培地MycoplasmaAgarMedium三磷酸腺苷結合盒亞家族G1抗體

土曲霉黃豆黃素;GlyciteinPPLO肉湯基礎PPLOブイヨン基礎PPLOBroth三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體

醬油曲霉黃芪皂苷II;astragalosidePPLO瓊脂基礎PPLOブイヨン基礎PPLOAgarBase抗ABC膜轉運蛋白抗體

寄生曲霉黃芪皂苷III;Astragalosid支原體肉湯基礎（Frey）マイコプラズブイヨン基礎MycoplasmaBrothMedium（Frey）ABI1/SSH3BP1蛋白抗體

米曲霉花椒素;8-Methoxypsoral肺炎支原體肉湯基礎肺炎マイコプラズマブイヨン基礎MycoplasmapneumoniaeBrothBase雄激素結合蛋白抗體

嗜熱鏈霉菌環(huán)氧澤瀉烯;Alismoxide培養(yǎng)基血管緊張素轉換酶2抗體

華美鏈霉菌海柯皂苷元;Hecogenin解脲支原體肉湯基礎マイコプラズマ?ウレアリチクムブイヨン基礎UreaplasmaurealyticumBrothBase腎上腺皮質發(fā)育異常蛋白抗體
Hep 3B2.CQ-E7細胞纖維母表面蛋白抗體五加苷E（標準品） Aluminum oxide, active

前列腺素E受體4相關蛋白抗體五加皂苷B（標準品） Aluminum oxide, active

FLAG Tag標簽抗體（N端）楤木（標準品） Aluminum potassium sulfate docecahydrate

成纖維生長因子受體2抗體楤木皂苷A Amikacin

成纖維生長因子受體4抗體粗葉懸鉤子甙 Aminophyllin hydrate

凝血酶原酶(纖維介素)抗體醋辛酯（標準品） Ammonium bismuth citrate, hydrate

衰老關鍵蛋白抗體大波斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（標準... Ammonium bromide

凋亡調節(jié)因之一抗體大車前苷(標準品) Ammonium iodide

凋亡調節(jié)因之一抗體（短型）大豆苷,黃豆苷 （標準品） Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate